برای رسم منحنی استاندارد از یک پروتئین که غلظت آن را می دانید استفاده کنید . برای استاندارد از BSA استفاده کنید .مثلا BSA با 5 غلظت
BSA 0.1 mg/ml، 0.2 mg/ml، 0.3 mg/ ml، 0.4mg/ml، 0.5mg/ml
BSA = Bovine Serum Albomin
نمونه های خود را یکی با همان غلظت و دیگری با 1/10 غلظت , دیگری را مثلا با 1/50 رقیق کنید
حالا باید طبق روش لوری جذب ها را بخوانید .نمودار خود را بر حسب mg/ml پروتئین و جذب بکشید .جذب های استاندارد را می خوانید و در روی محور ایگرگ می نویسید . غلظت های استاندارد را نیز روی محور ایکس مشخص کنید . بهترین خطی که از این 5 نقطه عبور می کند , یا به صورت دستی یا با نرم افزار اکسل رسم کنید .
با توجه به جذب نمونه های خود , به طوری که یک خط افقی از Abs (جذب) مورد نظر رسم می کنید , تا به منحنی استاندارد برخورد کند و از همان جا یک خط عمودی بکشید تا به محور ایکس برسد . جایی را که به محور ایکس برخورد کرده مشخص کنید .این نقطه غلظت پروتئین مورد نظر شما می باشد. سپس عدد به دست آمده را در ضریب رقت خود ضرب کنید.
در این روش از نمونه هایی که در بالا رقیق کرده اید آن نمونه ای را انتخاب کنید که عدد آن بین اعداد استاندارد باشد .
مثلا یک نمونه دارید که غلظت آن نا مشخص است . ابتدا از این نمونه چند رقت بسازید .
1/1 ، 1/10 ، 1/20 ، 1/50
استاندارد های خود را بسازید
BSA 0.1mg/ml 0.2 mg/ml 0.3 mg/ ml 0.4mg/ml 0.5mg/ml
طبق روش لوری عمل نمایید . منحنی استاندارد را در نمودار رسم کرده و بهترین خط را طبق آن رسم کنید . جذب نمونه ها را بخوانید . نمونه ای که جذب آن در محدوده جذب استانداردها است انتخاب کنید ( بقیه آنها دقت کافی را نخواهد داشت ) . یعنی نقاطی که به خط قهوه ای برسد فاقد اعتبار است . از نقطه ای که جذب آن مشخص است یک خط افقی رسم کنید تا به خط سبز برسید .سپس از آنجا یک خط رسم کنید تا محور ایکس را قطع کند . این نقطه غلظت نمونه شما است .که اگر رقیق کرده باشید , باید این عدد را در ضریب رقت ضرب کنید .
نظرات شما عزیزان:
زهره 
ساعت8:39---9 تير 1394
با سلام
آیا به غیر از BSA از ماده دیگری برای استاندارد سازی می توان استفاده کرد؟
پاسخ: بله اما معمول bsa میباشد
|
روز بخير كاربر مهمان! 
